本试剂盒是针对人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)的ELISA检测工具，专为科学研究而设计，严禁用于医学诊断。

试剂盒说明

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量测定样本中adropin（AD）的浓度。实验过程中，标本、标准品和HRP标记的检测抗体被依次加入到预先包被了adropin（AD）抗体的微孔中。经过温育和充分洗涤后，加入底物TMB，显色反应下，TMB在过氧化物酶的催化作用下，最终呈现出从蓝色转为黄色的变化，颜色深浅与样品中的adropin（AD）浓度呈正相关。采用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），从而计算样品的浓度。

样品收集及处理方法

1. 血清：使用无热原和内毒素的试管，确保操作过程中避免细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟以小心分离血清和红细胞。

2. 血浆：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟后取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入生理盐水，捣碎后3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：未及时检测的样本请按一次使用量分装并冻存于-20℃，避免反复冻融，在使用前室温解冻并确保样本均匀。

必备材料

1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒应存放于2-8℃，使用前需在室温下平衡20分钟。浓缩洗涤液如有结晶，需水浴加热溶解后再使用。

2. 未使用的板条应立即放回自封袋中密封保存。

3. 浓度为0的S0号标准品可视作阴性对照；样本经过5倍稀释，需将最终结果乘以5以求得实际浓度。

4. 按照说明书中规定的时间、加液量和顺序进行操作。

5. 所有液体组分使用前需充分混匀。

试剂盒组成

该试剂盒包括以下材料：微孔酶标板、标准品、样本稀释液、检测抗体-HRP、洗涤缓冲液、底物A和B、终止液、封板膜和说明书。其中标准品浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL。

洗板方法

1. 手工洗板：甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟，重复清洗5次。

2. 自动洗板机：每孔加入洗液350μL，浸泡1分钟，洗板5次。

操作步骤

1. 取出用铝箔袋包装的所需微孔板，剩余的使用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品和样本孔，标准品孔加入不同浓度的标准品50μL。

3. 样本孔先加入待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL，空白孔不加。

4. 向每个非空白孔中加入HRP标记的检测抗体100μL，封住反应孔，37℃水浴或恒温箱温育60分钟。

5. 弃去液体，拍干后每孔加入洗涤液，静置1分钟，再清洗5次。

6. 每孔加入底物A和B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

7. 加入终止液50μL，并在15分钟内在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

根据标准品浓度与OD值绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：在2-8℃避光防潮保存。

6. 有效期：6个月。

免责声明

本试剂盒仅供人生就是博-尊龙凯时研究使用，禁止用于临床实验或人体实验，实验者需对其后果负责。实验者务必严格按照说明书操作，违规操作后果自负。