TurboTEV蛋白酶是一种改良型的半胱氨酸蛋白酶，源自烟草蚀刻病毒（TEV）的N1a蛋白，其特定切割位点为Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly，能够在Gln与Gly之间进行裂解。TurboTEV蛋白酶以其高效的特异性和稳定性而闻名，尤其在4°C条件下表现出色。其活性不依赖于特定的缓冲液，可在最适合目标蛋白的缓冲液中直接使用。

这种52kDa的蛋白酶附带GST和His标签，使得通过Ni螯合和谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除标记物成为可能。一方面，TurboTEV蛋白酶来源于大肠杆菌，活性超过10单位/µg；另一方面，一个单位的TurboTEV蛋白酶能在30°C下，1小时内裂解3µg对照底物的85%。

操作步骤

1. 溶液裂解

• A. 准备新鲜的冷透析缓冲液（例如：25mM Tris-HCl, pH 8.0, 150-500mM NaCl, 14mM β-巯基乙醇）。
• B. 稀释目标蛋白样品池：
  • (a) 使用透析缓冲液将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。注意：若目标蛋白在透析缓冲液中聚集，此步骤可选择不进行。
  • (b) 留出一小份未切割样品以供后续分析。如果目标蛋白样品来自镍柱洗脱且与EDTA兼容，可加入EDTA使其最终浓度达到0.5mM。
• C. 按照1:100的比例添加TurboTEV蛋白酶，即每100 mg目标蛋白添加1000单位（1 mg）TurboTEV蛋白酶。
• D. 在4°C环境下，用透析缓冲液透析过夜（大约16小时）。

去除TurboTEV蛋白酶

上柱后可进行SDS-PAGE分析（可选）。

应用领域

• 蛋白裂解功能
• 去除重组蛋白的融合标签
• 蛋白质和肽的纯化

常见问题解答

1. 问：TEV消化反应对缓冲液条件的依赖性如何？常见缓冲液对TurboTEV剪切效率有不利影响的可能性如何？

答：在以下条件下，需谨慎使用：

• (a) 1mM DTT可以使用；
• (b) 不推荐使用10%的甘油；
• (c) 20mM组氨酸不推荐；
• (d) 500mM NaCl不建议；
• (e) 100mM Tris也不建议；
• (f) β-巯基乙醇的功能与DTT类似，可适量添加。

2. 问：在剪切之前，有必要进行缓冲液交换吗？

答：这可能是必要的。

TurboTEV蛋白酶是解决复杂生物研究问题的重要工具，应运用于多种生物医学领域，无论是在学术研究还是工业应用中，都展现出了其强大的功能。相信人生就是博-尊龙凯时能够为您提供更多相关产品和服务，助力您的科研工作。