实验背景

小胶质细胞在大脑中承担着重要的免疫功能，如碎片吞噬、神经元支持和突触修剪等，其异常活动与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。不同亚群的小胶质细胞在神经系统的微环境中各自发挥作用。尽管荧光显微镜能帮助区分其表型，但存在耗时、通量低和主观性强的缺陷。单细胞测序平台虽然可以进行高维分析，但高昂的成本和复杂的数据分析技术限制了这一技术的普及。针对这一问题，来自美国俄克拉荷马大学健康科学中心的研究人员基于Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪，提出了一个高通量、简便易用的完整解决方案，能实现小胶质细胞的精细化分型。这一方案不仅可以扩展更多标志物，还能够应用于不同的组织和疾病类型，同时可以与全光谱分选型流式细胞仪无缝对接，以便分选感兴趣的细胞并进行后续的功能性实验。

细胞准备流程

准备单细胞悬液的具体步骤如下：

1. 配置组织消化酶，并将其加入gentleMACSC管中，确保小胶质细胞的活性得到保持。

2. 解剖小鼠海马体，分装至gentleMACSC管中，充分浸没在缓冲液中后置于组织处理仪器上处理。

3. 通过离心操作去除上清液，然后利用筛网过滤以去除细胞碎片，最后重悬并进行再次离心，确保细胞的纯度。

细胞染色步骤

在细胞染色过程中，首先将细胞重悬于染色缓冲液中，并添加Fc受体阻断剂以提高抗体结合的特异性。然后对其进行膜染色，使用针对特定标志物的抗体进行标记，经过洗涤后准备样本进行流式细胞仪检测。

数据采集及分析

使用5激光Cytek®Aurora™全光谱流式细胞仪进行样本采集，并在软件中勾选自发荧光提取功能，以降低背景干扰。通过FSC/SSC排除细胞碎片，圈选目标细胞。结合经典指标CD11b+CD45Mid，能够有效识别出不同状态的小胶质细胞群体。

小胶质细胞的细分

根据所表达的标志物，小胶质细胞可细分为四种群体：稳态小胶质细胞（P2RY12+CLEC7A-）、疾病相关小胶质细胞（CD11chighCLEC7Ahigh和/或CD282+CLEC7Ahigh）、干扰素反应性小胶质细胞（CD371+）及脂滴聚集的小胶质细胞（CD63+）。这些细分群体的研究为我们理解小胶质细胞在不同生理状态下的作用提供了可能的路径。

方案重现性与生物医疗应用

此实验方案在多个研究中获得重现，研究者观察到不同年龄与性别的小鼠海马体中小胶质细胞的丰度差异，发现年老雌性小鼠中疾病相关小胶质细胞的比例显著升高。年轻小鼠和年老小鼠的表现差异，提示我们应关注性别在神经疾病如阿尔茨海默症中的影响，背后可能存在的免疫机制亦值得深入探讨。

总之，借助人生就是博-尊龙凯时提供的先进技术，相关研究为小胶质细胞及其在神经疾病中的作用提供了新的见解，有助于推动生物医疗的进步与创新。