猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用指南

产品概述

通用名称：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

包装规格

本产品提供的规格有：96T×1/盒、96T×2/盒及96T×5/盒。

预期用途

猪瘟由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起，是一种高度接触性的出血性和致命性传染病，常表现为高热及广泛出血、坏死等症状。本试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，可有效评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

原理

本试剂盒包含预包被有猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及配套试剂，采用酶联免疫检测（ELISA）原理，对猪血清及血浆样本中的猪瘟病毒抗体进行检测。实验中加入对照血清和待测样本，若样品中含有抗体，将与酶标板上的抗原结合。经过一系列洗涤步骤后，添加的酶标记物会与抗体-抗原复合物结合，最终产生颜色反应，颜色深浅与样品中的抗体含量成正比，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光值，从而判断样品是否含有猪瘟病毒抗体。

试剂盒组成与保存

试剂盒需在2～8℃环境中保存，有效期为12个月。开封后的包被板需要避光存放，避免潮湿，建议在2个月内使用完毕。

适用仪器

本试剂盒适用于配备有450nm和630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备及可调微量移液器。

样品准备

1. 采集动物全血，按常规方法制备清亮、无溶血和污染的血清。血清可在2～8℃下保存一周，长期保存需置于-20℃。
2. 用样品稀释液将待测血清稀释40倍（例如：5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴性和阳性对照无需稀释。
3. 使用前将浓缩洗涤液恢复到室温，后按20倍稀释成工作洗涤液（如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液）。

检验步骤

1. 使用前将试剂盒置于室温恢复30分钟。
2. 取所需数量的酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未用完的板条需要密封，存放于2～8℃。
3. 在阴、阳性对照孔各加入100μl对照液，样品孔每孔加入100μl稀释后的样品。
4. 混合均匀，覆盖盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
5. 弃去孔内液体，加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，并拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 洗涤，重复步骤5。
8. 每孔依次加入底物液A、底物液B各50μl，混合均匀，置于37℃避光反应10分钟。
9. 每孔加入终止液50μl，混合均匀，并在450nm（可用630nm作为参考波长）测定吸光值。

参考值与结果判定

在正常实验情况下，阴性对照的平均OD值应≤0.3，阳性对照的平均OD值应≥0.6。
1. 样品的OD值为ODS；
2. SP值计算公式：SP值 = (ODS - ODNC) / (ODPC - ODNC)；若SP值≥0.2，结果为阳性；若SP值＜0.2，结果为阴性。
3. 若结果为阴性，说明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

注意事项

1. 实验过程中需佩戴手套、穿工作服，严格遵循消毒隔离规程，废弃物需按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤和衣物。
3. 酶标板需恢复至室温后打开，未用完的板需放入干燥剂密封保存。
4. 浓缩洗涤液在低温下易结晶，使用前需恢复至室温。
5. 洗涤时各孔需充满液体，确保无游离酶残留。
6. 检测样品需保持新鲜。
7. 结果判定以酶标仪读数为标准。
8. 不同批号的试剂不能混用。

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